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本制品一种从唾液及尿液中的细胞和细菌基因组DNA提取试剂盒。本制品采用MCL裂解细胞，释放出基因组DNA，在结合液的作用下SgMag Beads选择性的吸附裂解液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗除去SgMag Beads吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下SgMagBeads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。采用本制品提取口腔上皮细胞和口腔细菌基因组DNA无需苯酚、氯仿等有毒试剂。获得DNA的OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。

• 自备材料：磁力架、水浴锅、离心机、1.5mL离心管、70%乙醇和RNase A溶液（10mg/mL）。
  
• 每次使用前请检查Buffer MCL是否出现沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解使用。

• 取样：
  唾液：量取250μL唾液至1.5mL离心管中。
  尿液：量取5～10mL新鲜的尿液，10000rpm离心2min，弃上清；然后向细胞沉淀中加入500μL PBS，充分悬浮细胞，10000rpm离心2min，弃上清。
  
  • 为确保样本不被食物或者饮品污染，一般漱口后15min采集唾液。
    
  • 量取的唾液用量可以适当调整，一般在200～300μL之间比较理想。
    
  • 尿液的取量可以根据实验要求适当调整，一般在2.5～10mL都可以获得比较理想的基因组DNA。
• 向上述离心管中加入350μL Buffer MCL和20μL Proteinase K，震荡混匀，65℃水浴20min，间或混匀。
  
  • 如果需要无RNA的基因组DNA，可以向离心管中加入20μL 10mg/mL的RNase A溶液。
• 水浴完成之后向离心管中加入350μL Buffer MA和25μL SgMag Beads，振荡或者颠倒混匀，室温静置3min，间或混匀。
  
  • 向离心管中加SgMag Beads之前，请将其充分混匀。
    
  • 请务必将SgMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留SgMag Beads吸打干净。
• 将离心管置于磁力架上30 s，待SgMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量SgMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入SgMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 向离心管中加入700μL 70%乙醇，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待SgMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量SgMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入SgMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤5一次，室温开盖干燥10min或者55℃恒温箱内开盖干燥5min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有SgMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
• 向离心管中加入50μL TE Buffer (pH8.0)，65℃水浴5min，间或混匀。
  
  • 请将管壁上所有的SgMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水（pH>7.5）代替。
• 取出离心管并置于磁力架上30 s，待SgMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保SgMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入SgMag Beads，否则影响基因组DNA的纯度。

• 得率低
  
  • 唾液或者尿液不新鲜或者唾液保存不当导致细胞破裂DNA降解；请采用新鲜的唾液或者尿液，需要保存时请采用适当的保存液。
    
  • 尿液需要离心获得尿液中细胞，吸弃上清时请勿吸到细胞沉淀。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MA和SgMag Beads之后，请将其充分混匀，并使SgMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失SgMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的SgMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的SgMag Beads也吸附至管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有SgMag Beads溶解在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5min，常温条件下SgMag Beads只能释放少量的基因组DNA，65℃条件下SgMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，SgMag Beads释放出大量的基因组DNA。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间不要超过30min。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求保存。请使用新鲜样品，样品如果因为某些原因必须先行保存，可以将样品保存于-70℃冰箱。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。
    若出现残液的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管内的液体。
    
  • SgMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使SgMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • SgMag Beads没有完全干燥。请将SgMag Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入SgMag Beads。请确保所有SgMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入SgMag Beads，请将上清液放回原管，待SgMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。